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        細(xì)胞培養(yǎng)常用的試劑有那些?

        2021-11-24 瀏覽次數(shù):2343

        1.谷氨酰胺使用方法是什么?

        答:谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,故4℃下放置1周可分解50%,使用中單獨(dú)配制,置-20℃冰箱中保存,用加入培養(yǎng)液中。

        2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定?

        答:碳酸氫鈉白色粉末,或不透明單斜晶系細(xì)微結(jié)晶。比重2.159。無臭、味咸,可溶于水,微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微堿性,受熱易分解,在65℃以上迅速分解,在270℃時(shí)*失去二氧化碳,在干燥空氣中無變化,在潮濕空氣中緩慢分解。


        3.培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢的原因有哪些?其解決辦法有哪些?

        答:可能得原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子等耗盡或缺乏或已被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)找出可能的原因。 

        解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷氨酰胺或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2 周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。


        4.L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?

        答:L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)非常重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過段時(shí)間后會降解,降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,而氨對于些細(xì)胞具有毒性。


        5.細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎?

        答:不見得!因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱膒H、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下,pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力強(qiáng)。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化,定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶,以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈,這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為: 
             (1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA; 
             (2)0.25% 胰蛋白酶 
             多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。


        6.二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎?使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么?

        答:二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞,用EDTA清洗細(xì)胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。


        7.GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?

        答:GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。 


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