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        HCT-8/V細胞- HCT-8/V耐藥株凍存

        2017-04-12 瀏覽次數:1394

        人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞    
        HCT8 V     貼壁上皮細胞
        (2)客戶自備試劑
        1)PBS
        2)RPMI-1640培養基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
        3)0.25% (W/V)胰蛋白酶(含0.02% EDTA)
        人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞(3)細胞背景
        1)生長方式:貼壁
        2)種屬:Homo sapiens 人
        (4)培養條件
        1)培養基:RPMI-1640培養基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
        2)溫度:37.0°C
        3)氣體:空氣 95%,CO2 5%
        (5)培養方法
         收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況:
         如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,留10ml培養液繼續培養。
         如果細胞已長滿(達80-90%)。即可進行傳代,具體步驟如下:
        1)棄去培養液,用PBS洗1-2次。
        2)向瓶內加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培養液,輕輕吹打細胞。
        3)加入等量的的培養液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養
        4)傳代比例:1:2-1:3
        人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞(6)常見問題及解決方案
        1)培養瓶有破裂,培養液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。
        2)細胞漂浮:培養瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留10ml培養液培養觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。
         

        細胞分離、培養、鑒定:
        (1)從中國正常人、中國病人、小鼠、大鼠、兔、豬、牛等等組織中對原代細胞進行分離、培養、鑒定:我們將以客戶要求為標準,提供多種屬如中國正常人、中國病人、小鼠、大鼠、兔、豬、牛、其它動物原代細胞的分離、培養、鑒定,并提供相應的文件、資料、數據和檢測證書。對于人源性細胞,必要時,在許可的條件下,我們盡可能的滿足客戶所提供的要求。
        (2)從建立實驗性疾病動物(小鼠、大鼠、兔)模型體內組織中對人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞進行分離、培養、鑒定: 我們將以客戶要求,建立標準實驗性疾病動物模型,或客戶提供實驗性疾病動物模型,對原代細胞進行分離、培養、鑒定,并提供相應的文件、資料、數據和檢測證書。

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