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        液體培養基的配置原則

        2022-12-12 瀏覽次數:1306

        根據培養目的需要選擇適宜的營養物質
        由于微生物營養類型復雜,不同微生物有不同的營養要求。因此,要根據不同微生物的營養需求選擇適宜的營養物質,配制針對性強的培養基。
        自養微生物有較強的合成能力,能以簡單的無機物如co2和無機鹽合成復雜的細胞物質。因此,培養自養微生物的培養基應由簡單的無機物組成。
        異養微生物的合成能力較弱,不能以CO2作為碳源或主要碳源,故應在培養基中至少添加一種有機物。
        注意營養物質的濃度與配比要合適
        微生物只有在營養物質濃度及其比例合適時才能良好生長。營養物質濃度過低不能滿足現生長需要,過高又抑制其生長。例如,適量的蔗糖是異養微生物的良好碳源和能源,但高濃度蔗糖則抑制菌體生長。金屬離子是微生物生長所需要的礦質養分,但濃度擴大,尤其是重金屬離子,反而抑制其生長,甚至產生殺菌作用。
        控制培養基的條件
        (1) 控制培養基的pH 配制培養基必須根據微生物的特點調節pH。各大類微生物要求的適宜生長pH范圍不同。如霉菌與酵母菌一般為5.0-6.0, 細菌為6.5-7.5.放線菌為7.5-8.5.培養基的pH與其C/N有極大關系。C/N高的培養基,例如培養各種真菌的培養基,經培養后其pH明顯下降;相反,C/N低的培養基,例如培養一般細菌的培養基, 經培養后,其pH則明顯上升。這是由于營養物質的消耗與代謝產物的積累,改變了培養基的pH,若不及時控制,將導致菌體生長停止。
        (2)調節氧化還原電位(Eh) 各種微生物對培養基的Eh要求不同。適宜好氧微生物生長的Eh值一般為+0.3~+0.4V,厭氧微生物只能在+0.1V以下生長,因此,培養好氧微生物必須保證氧的供應,可在培養基中加入氧化劑提高Eh值。
        (3)調節滲透壓 多數微生物能耐受較大范圍滲透壓的變化。培養基中營養物質的濃度過大,會使滲透壓過高,使細胞發生質壁分離而抑制微生物生長。低滲溶液則使細胞吸水膨脹易破裂,因此,配制培養基時要掌握營養物質的濃度。常在培養基中加人適量的Nacl以提高滲透壓。
        原料來源的選擇力求節約
        配制培養基還應遵循力求節約的原則,盡量選用價格便宜、來源方便的原料。特別是在工業發酵中,培養基用量大,更應注意利用低成本的原料,降低產品成本。
        滅菌處理
        為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養物,培養基必須及時嚴格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養基用0. IMPa (121℃)維持15 ~ 30min即可滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養基常用0.05MPa (110℃) 滅菌20 ~ 30min某些對糖類要求更高的培養基,可先將糖過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。長時間高溫滅菌也會使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽離子形成難溶性化合物而產生沉淀。為了防止這類沉淀發生,可將這些物質分別滅菌,冷卻后再混合;也可在培養基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡合物,防止沉淀的產生。高壓蒸汽滅菌一般使培養基 pH降低, 應在配制培養基時加以調節。

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