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        胰酶的使用注意事項及配制方法

        2022-06-21 瀏覽次數:4659

        胰酶使用注意:

        1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。

        2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。

        胰酶配制方法:

        1、培養液配制,方便好用,對細胞影響小,并且培養液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解

        2、生理鹽水配制,要先調ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250) 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時,調pH 7.8-8.0,過濾除菌。)

        3、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:稱取胰酶粉末0.1g,先用少許滅菌過的PBS調成糊狀,然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內過夜,過濾滅菌,分裝,4℃保存備用。); 或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液(pH7.2 左右)調成糊狀,然后再補足D-Hanks 平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4 小時或冰箱過夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進行過濾除菌,分裝入瓶中,低溫冰箱保存備用,常用濃度為0.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調用碳酸氫鈉溶液調pH 至7.2 左右。)

        一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌,至于作用效果,需要消化一次細胞感覺一下,因為不同廠家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。

        4、是否需要四度放置過夜,取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過夜. 而現在的胰酶純度都很高,就沒有必要四度過夜。從理論上來說,四度放置過夜,給細菌生長的機會,盡管過濾可以出去細菌,可是出不掉其代謝產物。

        胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,考慮有:

        1、過期或是酶已經部分變性

        2、溶液ph值不對

        3、在沒過濾之前的絮狀沉淀是正常現象,因胰酶多取自動物胰腺,沉淀為組織塊,過濾后即可。

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