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技術(shù)文章 / article
ELISA檢測血清的詳細事項
2022-06-07 瀏覽次數(shù)：1595
大部分elisa檢測均以血清為標本。血清標本可按慣例方法收集，應(yīng)留意防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本可能會添加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。
一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡。混濁或有沉積的血清標本應(yīng)先離心或過濾，弄清后再檢測。重復(fù)凍融會使抗體效價下跌，所以測抗體的血清標本如需保存作屢次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自收集時就應(yīng)留意無菌操作，也可參加適當防腐劑。
ELISA試劑盒檢測血清的詳細留意事項：
1) 要留意防止呈現(xiàn)嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。
2) 冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標本的混勻亦應(yīng)留意，不要進行劇烈振蕩，重復(fù)倒置混勻即可。
3) 標本在保存中如呈現(xiàn)細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉積后取上清檢測。
4) 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染，一則細菌的成長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。
5) 血清標本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長期保存，應(yīng)在-70℃以下。
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