細胞傳代培養(yǎng)小技巧
2022-01-17 瀏覽次數(shù)：1268
1.細胞生長至高密度時，即須分至新的培養(yǎng)瓶中，一般稀釋比例為1:3至1:6，依細胞種類而異。2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶)： 以10ml分裝于15ml無菌離心管中，保存于?20℃，使用前放在37℃ 水槽回溫。2.3.新鮮培養(yǎng)基2.4.無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶生3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用數(shù)分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，當細胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時，吸掉或者傾倒胰酶溶液。(若沒有*去除，則在胰酶作用后，加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用)3.1.4.輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。3.2.懸浮型細胞(suspensioncell)3.2.1.吸出細胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000rpm5-10分鐘。3.2.2.吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。有些雜交瘤需培養(yǎng)三天以上才會產(chǎn)生抗體，若是更換培養(yǎng)基，則可能會失去抗體。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基，直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分至新培養(yǎng)瓶中。
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