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        細(xì)胞培養(yǎng)不好怎么辦?

        2021-12-22 瀏覽次數(shù):1234

        培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁


        可能原因

        1.胰蛋白酶消化過度;

        2.支原體污染;

        3.培養(yǎng)基pH值過堿(NaHCO3分解);

        4.細(xì)胞老化;

        5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。

        解決方法

        1.縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度;

        2.分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;

        3.使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2;

        4.啟用新的保種細(xì)胞;

        5.調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。



        懸浮細(xì)胞成簇


        可能原因

        1.培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子;

        2.支原體污染;

        3.蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解;

        4.DNA污染。


        解決方法

        1.用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕巧吹吸2.細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液;

        3.分離培養(yǎng)物,檢測支原體;

        4.DNasel處理細(xì)胞。



        培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢



        可能原因

        1.由于更換不同培養(yǎng)液或血清;

        2.培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必須成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞;

        3.培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;

        4.試劑保存不當(dāng);

        5.接種細(xì)胞起始濃度太低;

        6.細(xì)胞已老化;

        7.支原體污染。


        解決方法

        1.比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn),讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;

        2.換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子;

        3.用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;

        4.血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;

        5.增加接種細(xì)胞起始濃度;

        6.換用新的保種細(xì)胞;

        7.分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。



        培養(yǎng)細(xì)胞生長不好



        可能原因

        細(xì)胞本身的狀態(tài)

        1. 細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;

        2. 細(xì)胞的接種量:接種量過低,細(xì)胞生長緩慢;

        3. 細(xì)胞傳代時(shí)間過晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長;

        4. 胰酶消化時(shí)間過長或過短:時(shí)間過長,細(xì)胞死亡;時(shí)間過短,細(xì)胞未*分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;

        5. 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速溶。


        污染

        1. 支原體污染;

        2. 霉菌污染。


        培養(yǎng)基或血清

        1. 更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證;

        2. 選擇的培養(yǎng)基是否合適;

        3. 培養(yǎng)基配制是否合適;

        4. 培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。


        培養(yǎng)環(huán)境

        1. CO2供應(yīng)是否正常;

        2. 培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

        解決方法


        根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因,做出針對性的解決方案

        1.注意細(xì)胞的本身狀態(tài):如傳代次數(shù),接種量等;

        2.避免產(chǎn)生污染(用正規(guī),合法,可朔源的血清);

        3.要用合適的血清或培養(yǎng)基,最好經(jīng)過驗(yàn)證;

        4.注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。



        培養(yǎng)細(xì)胞死亡



        可能原因

        1.培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2;

        2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大;

        3.細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷;

        4.培養(yǎng)液滲透壓不正確;

        5.培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。


        解決方法

        1.檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2;

        2.檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;

        3.取新的保存細(xì)胞種;

        4.檢測培養(yǎng)液滲透壓;

        5.換入新鮮培養(yǎng)液;


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