胎牛血清的這些指標(biāo)你都知道嗎？

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。
1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo)

一、內(nèi)毒素
內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的*成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時，才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡，血清中內(nèi)毒素含量越低，對細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長和傳代；內(nèi)毒素含量過高，會直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。國際上規(guī)定，胎牛血清的級別，應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來確定，其中，特級胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml

二、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細(xì)胞培養(yǎng)用血清的標(biāo)準(zhǔn)是血紅蛋白含量不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高；反之，數(shù)值越低。實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響。這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。

三、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說明采血的牛齡偏大，不是胎牛；數(shù)值偏低，表明血清可能摻水了。

四、pH值
根據(jù)藥典，胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間，并沒有什么具體依據(jù)把進(jìn)口血清和國產(chǎn)血清用7.5這個分界線界定。

五、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點(diǎn)法，滲透壓摩爾濃度（mOsmol/kg）：280-360之間

六、微生物
包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。如CellMax胎牛血清，3次0.1um無菌過濾以后，又通過培養(yǎng)法和DNA染色法進(jìn)行支原體檢測，結(jié)果均呈現(xiàn)陰性才會放行銷售。關(guān)于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入，又無法過濾，很難*清除，但對血清質(zhì)量影響不大，不過對于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來說，往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體。

七、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血時的牛齡情況，新生牛血清容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高；胎牛血清不含IgM，IgG的含量也較低。可以通過血清蛋白電泳SDS檢測。
低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產(chǎn)及相關(guān)領(lǐng)域。

有下列情況者，對血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選：
1.養(yǎng)干細(xì)胞時，干細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感，如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時，干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者，在血清在試用前，就通過提早審核該批次《檢測報(bào)告》，以決定是否入圍進(jìn)行試用。
2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時，過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。
3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài)，任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑，都會讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘，謬以千里"。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時，選擇極低的內(nèi)毒素（最好≤1EU/ml），對實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要；
4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染，或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增，這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此，挑選更低的內(nèi)毒素，是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。
5.實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞，需要長期培養(yǎng)、長期凍存，或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的，血清會經(jīng)常或長時間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康，都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清，以避免內(nèi)毒素長久對細(xì)胞的毒性影響。
總之，血清中內(nèi)毒素含量過高，更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康"，造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡，導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。
全球細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)會均依據(jù)內(nèi)毒素對血清的品質(zhì)進(jìn)行分級和命名。
內(nèi)毒素含量越低的血清，級別就越高，以胎牛血清為例：
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時，此血清為特級胎牛血清；
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml，≤ 25EU/ml時，此血清為優(yōu)級胎牛血清；
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時，此血清為標(biāo)準(zhǔn)級胎牛血清；