3T3-L1細(xì)胞小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

1） 來源：蒂科生物細(xì)胞庫

2） 形態(tài)：貼壁 成纖維細(xì)胞樣

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6） 運(yùn)輸：順豐發(fā)貨

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：DMEM(H)+10%NCS（推薦HAKATA貨號(hào):HN-FBS-500）

溫度：37℃     氣相：95%空氣，5%二氧化碳

傳代：

1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無菌操作臺(tái)，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；

2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:2到1:4；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（diyi次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為jia消化時(shí)間，記錄jia消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。

凍存：

建議使用本公司無血清細(xì)胞凍存液貨號(hào)：H-W-100，用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用。

保存條件：液氮存儲(chǔ)

溫馨提示：（常見問題，處理方式）

T25瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：diyi次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

熱銷細(xì)胞：

H031 NCI-H1299 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI1640+10%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H032 PANC-1 人胰腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H033 RBE 人肝膽管癌細(xì)胞 DMEM+10%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H034 SAOS-2 人成骨肉瘤細(xì)胞 McCoy's 5A+15%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H035 SiHa 人子宮頸鱗癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H036 NB 4 急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 圓形

H037 SPC-A-1 人肺腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H038 SW480 人結(jié)腸癌細(xì)胞 L-15+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H039 U-87MG 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H040 ZR-75-1 人乳腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H041 SW1116 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 L-15+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H042 293A 人胚腎細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H043 SGC-7901 人胃腺癌細(xì)胞 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H044 Ishikawa 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H045 Eca-109 人食管癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H046 RD-ES 人尤文氏肉瘤 RPMI-1640+15% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H047 NCI-H1437 人肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H048 HOS 人骨肉瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H049 Hela S3 人宮頸癌細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H050 ECC1 人宮頸內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H051 SUP-B15 人Ph+急淋白血病細(xì)胞系 IMDM+20% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣

H052 TF-1 人血液白血病細(xì)胞 RPMI1640+ 10% FBS+2ng/mL 重組人GM-CSF 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣

H053 NCI-H446 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H054 GES-1 人胃正常黏膜上皮細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H055 IOSE80 人卵巢正常上皮細(xì)胞株 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H056 GIST882 人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H057 KGN 人卵巢顆粒細(xì)胞癌 DMEM/F12(1:1)+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H058 U937 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 RPMI-1640 +10% FBS 懸浮 單核細(xì)胞樣

H059 SV-HUC-1 人膀胱上皮永生化細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H060 tpc-1 人乳頭瘤狀甲狀腺癌細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H061 hela-luci Luciferase穩(wěn)定表達(dá)Hela細(xì)胞 DMEM(L)+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H062 colo320 人結(jié)腸癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 半懸浮 圓形

H063 bxpc-3 人胰腺腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H064 raji 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣

H065 5637 人膀胱癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H066 chang-liver 人肝細(xì)胞(已被hela污染） DMEM(L)+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H067 a549-gfp gfp標(biāo)記的A549細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H068 hs578.t 人乳腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素 貼壁 上皮細(xì)胞樣

H069 T24 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 McCoy's 5A+15%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

3T3-L1細(xì)胞小鼠胚胎成纖維細(xì)胞