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        143B細胞人骨肉瘤細胞

        2020-06-08 瀏覽次數(shù):1350

        143B細胞人骨肉瘤細胞

        細胞名稱

        143B 人骨肉瘤細胞

        貨號

        H002

        種屬

        細胞來源

        從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

        生長特性

        貼壁 上皮樣

        培養(yǎng)條件

        培養(yǎng)基:90%DMEM(H)+10%FBS

        溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

        傳代

        1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,一般2到3天換一次液;

        2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,傳代比例為1:3到1:6;

        3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第D一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為D佳消化時間,記錄D佳消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細胞,進行傳代。

        保存

        凍存條件:80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO

        (備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預(yù)熱后使用。)

        保存條件:液氮存儲

        供應(yīng)限制

        經(jīng)供研究之用

        常見問題及解決方案

        1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。

        2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間長不宜超過 72 小時)

        3.細胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。

         

        143B細胞人骨肉瘤細胞

         

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        HT-29   人結(jié)腸癌細胞 McCoy's 5A+10%FBS 貼壁 上皮細胞樣

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        MCF7    人乳腺癌細胞 DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素 貼壁 上皮細胞樣

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