新生牛血清白蛋白的提取

　　新生牛血清白蛋白（BSA），又稱第五組分，是牛血清中的一種球蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430 kDa，等電點(diǎn)為4.7。新生牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在western blot中作為Blocking agent。

    新生牛血清白蛋白的提取大致可以分為5步。
　　1、鹽析：
　　取離心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸鹽緩沖生理鹽水）稀釋血清，搖勻后，逐滴加入pH7.2飽和硫酸銨溶液2mL，邊加邊搖，充分混勻，然后靜止放臵10分鐘，再離心（4000r/min）10min，將上清液傾入試管中。
　　2、透析：
　　取玻璃紙一張，折成袋形，將離心后的上清液倒入袋內(nèi)，用線扎緊上口（注意要留有空隙），用玻璃棒懸在盛有半杯蒸餾水的100mL燒杯內(nèi)，使透析袋下半部侵入水中，對(duì)蛋白液進(jìn)行透析，常用玻璃棒攪拌袋外（燒杯中）液體，以縮短透析時(shí)間。更換蒸餾水多次，用納氏試劑檢查袋外液體的NH4+，觀察顏色變化，直至袋內(nèi)鹽
　　分透析完畢。將袋內(nèi)液體傾入試管，即得牛血清白蛋白溶液。
　　3、電泳：
　　  1）點(diǎn)樣 取一張膜條，將薄膜無光澤面向下，放入培養(yǎng)皿中的巴比妥緩沖液中使膜條充分浸透，取出，用干凈濾紙吸去多余的緩沖液，以薄膜的無光澤面距一端1.5㎝處作點(diǎn)樣線，將牛血清樣品與待測(cè)的牛血清白蛋白溶液分別用點(diǎn)樣器在同一張薄膜的點(diǎn)樣線處不同位臵點(diǎn)樣。
　　  2）電泳 將點(diǎn)樣后的膜條臵于電泳槽架上，放臵時(shí)膜條無光澤面向下，點(diǎn)樣端臵于陰極，待平衡5min后，打開電源，調(diào)節(jié)電泳儀的電壓為160伏，通電60min，關(guān)閉電源后用鑷子將膜條取出。
　　  3）染色 將膜條直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染2分鐘取出，立即浸于漂洗液中，分別在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min，直至背景漂洗干凈為止，用濾紙吸干薄膜。
　　  4）鑒定 比較樣品與待測(cè)液中白蛋白在薄膜上的電泳結(jié)果，看位臵是否一致。
　　4、 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑：
　　儀器：離心管、離心機(jī)、試管、玻璃紙、燒杯、比色磁盤、滴管、玻璃棒、電泳儀、醋酸纖維素薄膜、分光光度計(jì)。
　　試劑：牛血清待測(cè)液、牛血清樣品、PBS（磷酸鹽緩沖生理鹽水，用0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.2）配制的0.9%NaCl溶液）、pH7.2飽和硫酸銨溶液、納氏試劑、巴比妥緩沖液、氨基黑10B染色液、漂洗液、0.4N氫氧化鈉溶液。
　　5、預(yù)測(cè)結(jié)果：
　　位臵一致，實(shí)驗(yàn)成功。若在待測(cè)液的電泳結(jié)果中出現(xiàn)其他球蛋白的黑帶區(qū)域，則說明提取不夠純。