上海蒂科生物血清一站式采購，一手貨源，保證，歡迎您的致電咨詢

1、 血清的主要成分和功能

牛血清在細胞培養中對細胞的生長增殖具有重要甚至是難以替代的作用，它含有豐富的細胞生長必須的營養成分。主要有以下成分和功能：

A、 血清中的主要物質—蛋白質如白蛋白等具有緩沖細胞培養液酸堿度、維持滲透壓的作用。

B、 轉鐵蛋白、甲狀腺素結合蛋白等結合蛋白，有識別維生素、脂類、金屬和其它激素等，并能與有毒金屬和熱原質結合，從而起到解毒作用。

C、 纖維粘連素、胎牛血清中的胎球蛋白、貼壁因子等能促進細胞貼壁、鋪展。

D、 多肽類如血小板促生長因子、成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經細胞生長因子、胰島素、類胰島素生長因子、促生長激素等能支持細胞分裂增殖并維持細胞對數生長。

E、 2巨球蛋白等蛋白酶抑制劑能抑制蛋白酶，保護細胞不受損害。

F、 血清中還含有豐富的氨基酸、葡萄糖、酮酸及與蛋白相結合狀態的微量元素等，對細胞培養均有意義。

正因為血清具有如此復雜的成分和重要的功能，所以血清的保存和使用顯得非常重要。

2、 保存血清的方法：

我們建議血清應保存在-15℃至-20℃，有效期為5年，若存放于4℃時，請勿超過四周，若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。不宜反復凍融。配制成*培養基后應在四周內用完。

3、 血清解凍后有絮狀沉淀物出現，該如何處理：

血清中沉淀物的出現有許多種原因，zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后也會存在于血清中，也是造成沉淀物的主要原因之一，但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質量，若您欲除去這些沉淀，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以直接過濾的方式去除這些沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。

4、 如何解凍血清才不會使血清質量受損：

我們建議您將血清從冷藏箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融，但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。

5、 為什么要熱滅活血清：

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦您使用熱滅活血清。

6、 有必要做熱滅活嗎：

實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數細胞而言是不需要的，經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱滅活處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，類似于“小黑點”形狀，這常常會讓研究者誤認為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱滅活處理，如此一來，不但節省您寶貴的時間，更確保血清的質量！

7、 如何避免沉淀物的產生：

我們建議您在使用血清的時候，注意下列操作：

A、 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時改變的溫度太大（如-20℃至37℃），實驗顯示非常容易產生沉淀物。

B、 解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

C、 請勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，從而影響血清質量。

D、 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可無須做此步驟，若必須做血清的熱滅活，請嚴格遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

ELISA檢測樣品的處理方法

通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步，下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。

1、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。

用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃GUOYE，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

2、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

3、  細胞培養上清

取細胞培養上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

4、  細胞裂解液

1）  吸去培養板內的培養基，用胰酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。

2）  收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。

3）  加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。

5）  4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

5、組織勻漿液

1）  將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質。

2）  將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分

3）  將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數）

4）  吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min，取上清即可檢測。

總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。

為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測；4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。

另外，還應保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。