細(xì)胞培養(yǎng)及種類與基本成分與選購指南 蒂科生物

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細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需要實驗者自己配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供，用戶可直接使用，非常方便。

1，合成培養(yǎng)基的主要成分有：氨基酸，碳水化合物，無機鹽，維生素及其他輔助位置：

氨基酸

氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氧酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必須的氨基酸，在缺少谷氧酰胺時，細(xì)胞生長不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的的谷氧酰胺。但是，由于谷氧酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氧酰胺得培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲存兩周以上時，還應(yīng)重新加入原來量的谷氧酰胺。

碳水化合物

碳水化合物是細(xì)胞生長主要能量來源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖，核糖，脫氧核糖，丙酮酸鈉和醋酸等.

無機鹽

培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素，細(xì)胞通常可耐受260m0sm/kg～320m0sm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其他物質(zhì)有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。

緩沖系統(tǒng)

大多數(shù)細(xì)胞所需pH在7.2-7.4.但是，細(xì)胞培養(yǎng)zui適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成成纖維細(xì)胞喜歡較高pH（7.4-7.7）而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH（7.0-7.4）。

由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHC03）與C02體系進行緩沖，因此氣相中的C02濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中C02濃度設(shè)定在5%，培養(yǎng)液中NaHC03的加入量為1.97g/L;如果C02濃度維持在10%，培養(yǎng)液中NaHC03的加入量為3.95g/L。

細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)該擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L）共用，以抵消因2額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。

維生素

在細(xì)胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素重要來源，但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長。

其他成分

有一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其他一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養(yǎng)液，使用時還需要補加丙酮酸鈉和2-疏基乙醇（2-Mercaptoethanol，2-Me）對細(xì)胞生長有很重要的作用。有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細(xì)胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氧基，其中一個重要的作用是使血清中的含硫的化合物還原成谷胱甘肽，能誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，為非特異性的激活作用。同時避免過氧化物對培養(yǎng)細(xì)胞的損害。另一個重要作用是促進分裂原的反應(yīng)和DNA合成，增加植物凝集素（PHA）對淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外，也開始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2-Me是一種小分子還原劑，極易氧化。分子量為78.13，純的2-Me是無色有刺激味的液體，比重為10110-1.120（Do20），常用終濃度為5×10-5M。常配制成0.1M的儲存液，用時每升培養(yǎng)液加0.5ml。

液體培養(yǎng)基保存：

液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存，實驗前放入37℃預(yù)熱。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12個月。液體培養(yǎng)基中的L-谷氧酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細(xì)胞生長不良，可以再添加適量L-谷氧酰胺。

干粉培養(yǎng)基保存：

4℃冰箱避光保存，有效期36個月

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